琥珀突变型辅助病毒VCSM13N1的构建

[琥珀突变型辅助病毒VCSM13N1的构建]目的:构建带有琥珀突变的辅助病毒VCSM13N1,为建立选择感染性噬菌体(SIP)技术平台奠定基础方法:选择辅助病毒VCSM13蛋白Ⅲ N1区的Q51作为靶位点,采用重叠延伸PCR方法对其进行定点突变,经酶切及序列分析进行确认;噬斑计数法检测该琥珀突变

[琥珀突变型辅助病毒VCSM13N1的构建]

目的:构建带有琥珀突变的辅助病毒VCSM13N1,为建立选择感染性噬菌体(SIP)技术平台奠定基础.方法:选择辅助病毒VCSM13蛋白Ⅲ N1区的Q51作为靶位点,采用重叠延伸PCR方法对其进行定点突变,经酶切及序列分析进行确认;噬斑计数法检测该琥珀突变在允许和非允许菌株中的开、关效应;以HBsAg抗体作为模式体系来确定该突变子作为辅助病毒的可行性,并对其性能进行综合评价. 结果:获得了琥珀突变子VCSM13N1,在允许菌株XL1-Blue中其滴度达到2.5×1011,与野生型VCSM13相似(4×1011),而用非许可菌株HB2151进行噬斑计数时,滴度在106水平,降低了数万倍.来源于菌株HB2151的突变病毒感染XL1-Blue计数噬斑,其滴度最高为5×109,降低了50倍;以其在许可菌中制备HBsAg噬菌体抗体,可以得到与野生型相似的结果.结论:琥珀突变子VCSM13N1可以作为辅助病毒,而且在非允许菌株HB2151中有一定的关闭效应.

作者：高荣凯王琰 GAO Rong-kai WANG Yan 作者单位：海军总医院中心实验科,北京,100037 刊名：第二军医大学学报 ISTIC PKU 英文刊名： ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 2005 26(12) 分类号： Q782 关键词：突变辅助病毒选择感染性噬菌体

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